FIX: 지정되지 않은 작은 테이프가 있는 PCr 오류 수정

컴퓨터가 작동 중이면 이 소프트웨어가 문제를 해결하고 데이터를 보호합니다.

오늘의 리드는 “작고 비특이적인 밴드에 대한 PCR 고려 사항 문제 해결” 오류 이메일을 받는 데 도움이 되도록 설계되었습니다.dNTP에서 추정된 품질과 농도는 PCR 증폭의 효율성과 밀접한 관련이 있습니다. 일반적으로 힘이 너무 크면 비특이적 얼룩이 나타날 수 있습니다. 또한, dNTP는 Mg2+와 결합하여 유리 Mg2+의 농도를 감소시켜야 합니다.

<본체>

이동 시간 및 온도 우수 루프가 너무 적음 PCR 주기를 너무 많이 사용하면 증폭이 충분하지 않을 수 있습니다. 20~35회 정도 사용합니다. 브랜드 이름의 농도가 특히 높을 때 더 적은 수를 사용하고 구조의 농도가 낮을 ​​때 다른 사이클을 사용하십시오. 갱신 기간도 만료됨 대부분의 업데이트 시간이 믿을 수 없을 정도로 짧다면 귀사는 시장에서 타겟을 완전히 복제할 시간이 부족한 것입니다. 매우 일반적인 규칙으로 1분/kb의 확장 기회를 사용합니다. 쇼트와 관련되어 글로우가 끝났습니다 이러한 어닐링 시간이 너무 짧다면 의심할 여지 없이 프라이머가 모델에 직접 부착할 수 있는 시간이 없을 것입니다. 최소한 30의 조명 시간을 사용하십시오. 어닐링 온도가 너무 높아짐 어닐링 온도가 너무 높으면 프라이머가 스탬프 경로에 결합할 수 없습니다. 일반적으로 환상적인 어닐링 온도는 프라이머보다 5 ° C 낮추는 것을 권장합니다. T m 프라이머를 평가하려면 www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc.html에서 해양 표준 농도와 0.2-1μM 101(에 따라 다름 귀하의 주요 응용 프로그램). 배타적 소둔 온도를 계산할 때 가장 낮은 T m 프라이머를 사용하십시오. 정확성을 높이기 위해 완전히 새로운 온도 경사를 사용하여 어닐링 조건을 최적화할 수 있습니다. 프라이머의 T n 이 온도(72°C) 부근에서 -2°C인 경우 2단계 PCR 과정을 고려합니다. 온도 o 시작은 가장 확실하게 포맷 온도를 초과하지 않아야 합니다. 변성 온도가 너무 낮습니다 denaturation 온도가 너무 낮으면 DNA가 증폭을 크게 denature하지 않고 효율도 낮아질 수 있다. 95 ° C를 통해 변성을 사용하십시오. 변성 순간이 너무 길었습니다 사람의 변성 시간이 일반적으로 너무 길면 DNA가 변경될 수 있습니다. 초기 변성의 경우 93°C에서 3분; 3주기를 의미하는 변성에 대해 95°C에서 0초를 사용합니다. 변성 시간이 너무 짧았습니다 사람의 변성 시간이 너무 짧으면 이 DNA가 완전히 변성되지 않을 뿐만 아니라 증폭 효율도 일반적으로 낮습니다. 초기 변성의 경우 최소 3개의 조각을 사용하여 중합효소를 초기화합니다. 일반적으로 조정하는 동안 스텐실을 변성하고 29초를 사용합니다.

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PCR 구성 요소와 관련된 이유

와 동일합니다. dNTP 농도가 실제로 높았습니다 dNTP의 총 신체 움직임이 너무 높으면 Mg가 감소합니다. 2+ … DNTP는 각 행동 촉구에서 200μM을 제공해야 합니다. dNTP 농도가 너무 믿을 수 없을 정도로 낮았습니다 각 dNTP는 200μM의 농도에서 최종 알레르기 반응에 존재하는 것으로 되돌아갈 가능성이 있습니다. PCR 산물은 기능성 높은 GC 함량(> 65%)을 가집니다. GC가 풍부한 PCR 산물은 증폭이 어렵습니다. 개더링을 극적으로 향상시키려면 어닐링 온도를 높이십시오. 정확도를 높이려면 온도 구배로 약물의 열을 최적화하십시오. 2차 구조와 관련된 DMSO 또는 기타 불안정화제를 추가할 것입니다(10%와 비교하면 더 이상 사용하지 않음). 억제제로 구성된 모델이 충돌하거나 성능이 저하되었습니다. 템플릿은 절단될 수 있거나 PCR 억제제가 있습니다. 억제제가 진단되면 매트릭스를 희석하십시오. 활성화되지 않은 경우 새로운 인터넷을 활용하고 이 주기를 늘립니다. 억제 효과가 있는지 확인하기 위해 이 완전한 동기가 추가된 순수 플라스미드를 사용하여 제어 응답을 구동해 보십시오. 프라이머에는 불순물이 포함되어 있습니다 프라이머를 오염시키면 PCR을 영구적으로 방해할 수 있습니다. 사용광물화되거나 더 정제된 프라이머. 그들은 실제로 억제 효과가 있는지 확인하기 위해 상업적으로 판매되는 프라이머를 희석하려고 노력하지만 각각의 모든 단일 프라이머의 0.02μM에 비해 적은 양을 추가합니다. 대답은 충분히 세련되지 않았습니다 패턴을 포함한 비정상적인 양이 매우 적으면 불충분한 게인이 발생해야 합니다. 배치 증폭 시리즈의 수를 5로 늘리거나 가능한 경우 템플릿 수를 늘립니다. 불순한 dNTP 사용 새로운 dNTP 혼합물의 오염 물질은 PCR 증폭도 불완전하거나 부정확하게 억제할 수 있습니다. 높은 우수한 dNTP를 사용하십시오. 입문서 지식이 너무 높았습니다 프라이머의 증가된 초점을 사용하면 프라이머가 비특이적으로 결합하여 템플릿에서 사용 가능한 원치 않는 사이트를 실제로 결합하고/하거나 서로 희망적으로 결합할 가능성이 증가할 수 있습니다. 최상의 감정을 위해 일반적으로 0.2~1미터 범위에서 사용할 수 있는 잘 구성된 프라이머를 사용하십시오. 또한 농도가 일반적으로 제조사로 표시되는지 확인하십시오. 프라이머 농도가 너무 낮음 특정 프라이머 농도도 낮을 수 있으면 어닐링이 낭비될 수 있습니다. 후자의 경우 잘 설계된 0.2–1 µm 프라이머를 사용합니다. 또한 농도가 개인 제조업체에서 제공한 것인지 확인하십시오. 효소 농도도 처음에는 낮았습니다 포괄적인 중합효소 농도가 너무 낮으면 이 도구는 모든 PCR 산물이 완전히 복제되지 않을 것이라는 점을 분명히 합니다. 최적의 효소 농도는 에디션의 길이와 복잡성에 따라 다릅니다. 프라이머가 사용자 또는 딜러에 의해 잘못 생성 또는 발견되었습니다 프라이머가 올바른 순서로 있는지 확인하고 패턴을 조화시킵니다. 프라이머 스타일 및 디자인 프로그램을 사용하여 반복적인 서열, 상보성이 높은 국가 등에 대응하십시오. 프라이머가 유사유전자 또는 1차 정통한 영역을 증가시킬 수 있는 것을 피하기 위해 완벽한 BLAST 검색을 수행하십시오. T < 서브> m . T k 가 가장 작은 페인트 프라이머를 사용하십시오. 대상이 너무 깁니다 PCR 구성 요소 및/또는 실행 환경의 농도가 더 긴 표적 서열을 푸시하기에 충분하지 않을 수 있습니다. 분석 프로토콜의 현재를 최적화하고 거부 경로를 포함하여 대부분의 PCR 단계의 기간을 각각 연장하거나 연장합니다. 물이 안전하지 않았습니다 얼마 전까지만 해도 피펫팅 중에 물이 오염되었을 수 있습니다. 시원하고 뉴클레아제가 없는 물을 사용하십시오. 마그네슘 아님 2+ 대안적으로 가능한 마그네슘 결핍은 하나 이상의 PCR 제품 전체에서 발생합니다. 최종 다른 반응에 1.5mM을 사용합니다.

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