ИСПРАВЛЕНИЕ: исправлена ​​ошибка PCr для неуказанных небольших лент

Когда ваш компьютер барахлит, это программное обеспечение исправит это и защитит ваши данные.

Сегодняшнее руководство предназначено для того, чтобы помочь вам, если вы получаете сообщение об ошибке “Устранение неполадок ПЦР для небольших неспецифических полос”.Оцененное качество и концентрация dNTP тесно связаны с эффективностью звука ПЦР. Если сила слишком велика, могут появиться неспецифические полосы. При увеличении dNTP можно комбинировать с Mg2+ для снижения концентрации связанного свободного Mg2+.

<тело>

Время в пути плюс причины температуры Используется слишком мало завитков Использование слишком большого количества циклов ПЦР может привести к недостаточному бустингу. Используйте от 20 до 35 циклов. Используйте меньше циклов, когда концентрация на модели особенно высока, а также используйте больше циклов, когда осведомленность о структуре низкая. Время продления также истекло Если время обновления короткое, у вас заканчивается время, необходимое для полной репликации фокуса. Как правило, используйте прекрасное время расширения 1 мин на КБ. Свечение было из-за короткого замыкания Если время отжига слишком короткое, грунтовки не успеют прикрепиться к модели. Используйте время свечения не менее 30 секунд. Слишком высокая температура отжига Если климатические условия отжига слишком высокие, грунтовки не могут закрепиться на траектории штампа. Как правило, следует использовать температуру отжига на 1°С ниже, чем у большинства грунтовок. Чтобы оценить T m грунтовки для краски, используйте инструмент на сайте www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc.html, концентрацию морского стандарта и одну реакцию 0,2–1 мкМ (в зависимости от ваших потребностей). применение). При расчете этой конкретной температуры отжига используйте нижний грунт T m . Для большей точности вы можете оптимизировать фактическую температуру отжига, используя совершенно новый температурный градиент. Если T m праймера всегда составляет минус 5 ° C при погоде (72 ° C), рассмотрите любой вариант двухэтапного протокола ПЦР. Температура начала не должна превышать формат погоды. Слишком низкая температура денатурации Если температура денатурации была слишком низкой, ДНК больше не будет полностью денатурировать при амплификации, и некоторая эффективность также будет низкой. Используйте денатурацию при 95°С. Время денатурации слишком мало Если время денатурации обычно слишком велико, ДНК всегда может быть изменена. Для начальной денатурации 3 трафаретных единицы при 95°С; использовать 3 секунды при 95°С с учетом денатурации в течение 3 циклов. Время денатурации было слишком коротким

<тд> Если время денатурации слишком короткое, эта ДНК не будет полностью денатурирована, и эффективность амплификации также может быть низкой. Для первой денатурации используйте не менее 3 штук на рынке для активации полимеразы; Обычно денатурируют эти трафареты во время езды на велосипеде, используйте двадцать девять минут.

<тело>

Причины, основанные на компонентах PCR Целевой показатель dNTP также был высоким Если общая концентрация dNTP просто слишком высока, происходит снижение только Mg 2+ … DNTP фактически обрабатывают 200 мкМ на протяжении каждой реакции. Концентрация дНТФ была бы слишком низкой Каждый dNTP, вероятно, присутствует в этой конечной реакции в концентрации, близкой к 200 мкМ. Метод ПЦР имеет высокий GC сообщений в блогах (> 65%) Продукты ПЦР, обогащенные ГХ, могут быть трудно амплифицируемыми. Чтобы значительно улучшить внешний вид усиления, увеличьте диапазон температур отжига. Для большей точности оптимизируйте нагрев заживления с наклоном температуры. Можно добавить ДМСО или различные дестабилизаторы вторичной организации (не более 10%). Дизайн и стиль были повреждены или деградировали, состояли в ингибиторах Матрица может иметь форму или содержать ингибиторы ПЦР. Если подозреваются ингибиторы, разбавьте матрицу; если вы не активны, используйте свежий интернет, дополнительно увеличьте количество циклов. Попробуйте запустить фактическую контрольную реакцию, используя соответствующую плазмиду с добавленным полным мотивом, чтобы увидеть, есть ли каждый ингибирующий эффект. Грунтовки содержат загрязнения Загрязняющие праймеры могут постоянно мешать проведению ПЦР. Используются деминерализованные или, возможно, более белые грунтовки. Они легко пытаются уменьшить коммерчески доступные праймеры, чтобы увидеть, есть ли у вас ингибирующий эффект, но каким-то образом добавляют меньше по сравнению с 0,02 мкМ для каждого праймера. Выполнение было недостаточно стильным Если исходное количество, включая внешний вид, слишком мало, может возникнуть недостаточное усиление. Увеличьте количество циклов усиления коробки на 5 или, если сочтете возможным, увеличьте количество структур. Использованы нечистые dNTP Загрязнения в смеси dNTP могут привести к неполному или неправильному типу ингибирования или амплификации ПЦР. Используйте высококачественные dNTP. Начальное понимание было слишком высоким Использование невероятно увеличенной концентрации праймеров может увеличить ваши шансы на то, что праймеры на самом деле будут связываться неспецифически, на самом деле связываться с неудобными участками на шаблоне и друг с другом или, возможно, друг с другом. Для наилучшего отклика используйте праймеры с правильным составом, открытые в диапазоне от 0,2 до 1 мультиметра. Также удостоверьтесь, что в фокусе обычно указывается скорость, а также производитель. Концентрация грунтовки также низкая Если удельная концентрация 101 также низка, отжиг может оказаться неэффективным. Для последней мысли используйте хорошо разработанные праймеры 0,2–1 мкм. Также убедитесь, что концентрация указана производителем. Химическая концентрация также была низкой Если общая концентрация полимеразы в то же время низкая, очевидно, что вряд ли все продукты ПЦР будут полностью воспроизведены. Оптимальная концентрация фермента зависит от длины и сложности модели. Праймеры были задуманы или созданы неправильно злоумышленником или производителем Убедитесь, что его праймеры правильно выбраны и дополняют шаблон. Используйте программу создания праймеров, чтобы противодействовать сходным последовательностям, областям высокой комплементарности и т. д. Выполните поиск BLAST, чтобы избежать праймеров, которые могут увеличить количество псевдогенов или, альтернативно, первичных случайных областей. Используйте ценный инструмент на www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc.html для пополнения запасов с фактической стандартной концентрацией соли, а также на том основании, что с праймером 0,2–1 мкМ (в зависимости от лучших условий) при расчете Т м . Используйте грунтовку с наименьшей T m . Пинпойнт был слишком долгим Уровни компонентов ПЦР и/или условия проведения могут не быть необходимыми для создания более длинных целевых последовательностей. Оптимизируйте отображение метода анализа и/или увеличьте продолжительность этапов ПЦР, включая часто этап отбраковки. Вода была нечистая Незадолго до этого вода могла быть загрязнена из-за пипетирования. Используйте прохладную воду без нуклеаз. Не Mg 2+ Отсутствие или возможное отсутствие витамина магния приводит к одному или нескольким продуктам ПЦР. Часто используют 1,5 мМ для окончательной специфической реакции.

Нужно исправить ошибки Windows? Reimage может помочь

Ваш компьютер работает медленно и тормозит? Вы получаете ужасный синий экран смерти? Тогда пришло время скачать Restoro! Это революционное программное обеспечение исправит все ваши распространенные ошибки Windows, защитит ваши файлы от потери или повреждения и обеспечит оптимальную работу вашего оборудования. И так, чего же ты ждешь? Загрузите Ресторо прямо сейчас!

  • 1. Загрузите и установите программное обеспечение Reimage.
  • 2. Откройте программу и нажмите "Поиск проблем"
  • .
  • 3. Нажмите "Восстановить все", чтобы начать восстановление.

  • Ваш компьютер доставляет вам неприятности? Расслабьтесь, есть решение! Нажмите сюда для того, чтобы скачать.

    Pcr Troubleshooting Small Non Specific Bands
    Pcr Fehlerbehebung Bei Kleinen Nicht Spezifischen Bandern
    Pcr Probleemoplossing Voor Kleine Niet Specifieke Banden
    Pcr Rozwiazywanie Problemow Z Malymi Niespecyficznymi Pasmami
    Pcr Depannage De Petites Bandes Non Specifiques
    Resolucao De Problemas De Pcr Pequenas Bandas Nao Especificas
    Pcr 문제 해결 작은 비특정 밴드
    Pcr Solucion De Problemas De Bandas Pequenas No Especificas
    Pcr Risoluzione Dei Problemi Di Piccole Bande Non Specifiche
    Pcr Felsokning Av Sma Ospecifika Band

    г.